1、不同濃度分離液的制備: 

先用9份分離液與1份8.5％ NaCl或1.5MPBS混合達到生理性滲透壓，然后用生理溶液稀釋到所需濃度。

2、不連續密度梯度層的制備: 

先將試管壁用牛血清濕潤，除去多余血清，這種預處理可使逐層疊加的液平穩沿管壁流下，使形成滿意的界面。

在制備過程中一般用長針頭注射器從高密度向低密度逐層放置，有時相鄰兩層比重相差不大時，可將液放入注射器中，小針頭斜面緊貼管壁，任其自然慢慢流下。

3、裝樣：

樣品體積和細胞濃度根據不同細胞而異，一般加樣體積不宜過大，細胞濃度也不可過高，否則會影響細胞的分離和回收。

4、離心：

一般采用離心力為400g，時間20～25min。

由于多層之間密度差別不大，因此離心機加速、降速時要慢，要平穩。

5、取樣：

當所要分離的細胞絕大部分在兩層的界面時，可逐層去除液后收集界面部位的細胞;有時大部分細胞位于層中,則需要逐層收集。收獲含有液的細胞經2次洗滌后可供培養或檢測用。

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